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猪场疫病的实验室检测技术

来源:互联网发布时间:2017/12/5 关注:1020
近年来,养猪行情时好时坏,其中影响养猪效益的主要原因仍是猪病。在养猪业走向规模化的进程中,猪病也表现出多元化、复杂化的动态发展趋势,非典型疫病越来越多,为确诊带来了很大困难。随着分子生物学的迅速发展,各种快速准确的监测技术在猪病防治中发挥着重大的作用。
1 实验室检测技术应用现状
当前危害养猪业的疾病主要还是细菌病和病毒病,对于目前“病毒搭台,细菌唱戏”的局面,养殖场通常采取的措施是大量使用疫苗和抗生素,但是疫情仍未得到有效控制。这就需要发挥实验室的强大作用,从抗体和病原的监测着手,了解猪群的健康状况,找出发病的真正原因,以防为主,防治结合,达到有效控制疫情的目的。
1.1 病原检测
目前细菌性疾病多数采用微生物学诊断,包括细菌的分离培养、生理生化鉴定、药物敏感试验。对于难以培养的病原菌比如近年流行的副猪嗜血杆菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌等,很多实验室建立了PCR、环介导等温扩增、乳胶凝集试验以及ELISA 等分子生物学或血清学诊断方法,已经得到广泛应用。病毒性疾病最常用的也是基因检测方法,其具有特异性强、快速灵敏等优点,如猪瘟病毒的PCR 检测、蓝耳病病毒的荧光定量PCR 检测等。也有学者研发了ELISA 等血清学诊断方法。
1.2 抗体检测
随着科学养猪的理念深入人心,接种疫苗后的抗体水平监测已经成为猪场的一项常规检测项目,以便评估免疫效果,及时调整免疫程序。常用方法包括ELISA、乳胶凝集等,多数都是商业化的试剂盒。不同厂家的试剂盒检测结果有一定的差异。
2 送检样品的要求
根据检测目的采集相应的具有代表性的样品,正确保存和运输,选择可靠的实验室。
2.1 细菌性疾病样品
细菌性疾病样品包括病变组织、胸腔腹腔积液、心包积液、血液以及消化道内容物等。应做到无菌采集,各个样品分开包装(如固体样品可用封口袋、液体样品用注射器盛装),标签应注明样品名称、采集时间,最好说明可能的病原菌,冷藏保存并送检(通常采用泡沫盒子里放置冰袋以保温)。
2.2 病毒性疾病样品
发生病毒病后,多数病毒可大量存在于肺脏、脾脏以及淋巴结等组织中,在病毒血症期血液中也含有大量病毒,公猪感染几种病毒性繁殖障碍性疾病时,精液中也可以检出病毒。应根据各种病毒性疾病的发病特点及排毒情况,选择相应的样品送检。病毒样品通常冷冻保存、冷藏运输。
2.3 血清样品
血清主要用于抗体水平的监测,常采取抽样的方式送检。样本数的确定要考虑到检测成本和科学性,即应该具有统计学意义,能通过抽样检查评估整体水平。很多猪场兽医常用耳缘静脉采血,虽然该法简单易行,但易污染微生物,且易形成血肿。如果采血过程中不慎污染了消毒液,还会导致严重的溶血。一般采用前腔静脉或颈静脉采血法,可将采集的血液置于室温放置2 ~ 5 h 使血液凝固自然析出血清(不需要将注射器中的血液转移到其他容器),也可将血液转入离心管中2 500 ~ 3 000 r/min 离心5 ~ 10 min分离血清。冷藏保存,及时送检。
3 检测结果的评价
3.1 假阳性和假阴性
假阳性在实验室检测中时有发生。诸如样品包装不当造成交叉污染;注射疫苗后没能得到彻底清除而使检测结果呈阳性;实验室试剂、环境、用具被核酸及病原体污染等等。假阴性结果出现几率高于假阳性结果,比如某种病毒或者细菌的分离培养呈阴性,通过电镜或荧光抗体检测未能观察到病原或通过PCR方法未能检测到病毒的特异核酸等,有如下多个方面的原因。1)某些病原的培养条件非常苛刻,技术含量高或者采集样品是经过治疗后的猪(如感染副猪嗜血杆菌的病猪经抗生素治疗后很难从其体内分离到该病原菌),这些情况下往往病原的培养结果为阴性。2)送检样品不具有代表性,可能选择的猪已经耐过或者采集的部位不是病原含量高的部位,也会出现检测结果为阴性。3)样品的贮存和运输方式不当造成病原的存活力下降甚至降解(如流感病毒即使在冷藏情况下不及时送检,很难分离到流感病毒)。4)送检样品中被检对象的浓度低于所使用检测方法能检出的最低浓度。鉴于以上原因,我们在采集样品和实验室检测过程中要科学严谨,尽量减少假阳性和假阴性的出现。
3.2 检测结果与最终诊断结果

检测结果并不代表最终诊断结果,诊断结果需要结合猪场实际情况综合分析,包括猪场的管理、免疫程序的实施、发病情况、临床症状、剖检病变以及发病后采取的应急措施和效果。某些时候病原检测阳性只能证明病原的存在,而对于病原在疾病发生发展中的具体作用仍无法了解;阴性结果也并不能肯定排除该病原在疾病中的重要作用。同时还应排除人为因素造成的假阳性和假阴性的影响,如送检样品的代表性、样品包装和运输的科学性以及试验结果的可靠性等。猪场兽医、技术专家与实验室技术人员应该发挥团队协作精神,以便找出真正的病因,制定科学有效的处理方案。





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